【摘要】目的建立瞬时性受体电位通道香草酸受体亚型6（Trpv6）基因敲除小鼠模型，为在体研究Trpv6的生物学功能及其与骨代谢关系奠定基础。方法从Ensembl数据库中获得小鼠Trpv6基因组序列。设计基因敲除策略，构建基因敲除载体pBR322-MK-Trpv6。以电穿孔方法将基因敲除载体导入胚胎多能干细胞（Es细胞），用G418和Ganciclovoir进行正负筛选，获得双抗性克隆。PCR鉴定出正确同源重组的ES细胞克隆。将正确同源重组的Es细胞注射到C57BL／6J小鼠的囊胚中，获得嵌合体小鼠。挑选嵌合率在50％的雄鼠与C57BL／6J小鼠交配，获得的灰鼠经PCR鉴定为杂合子小鼠。杂合子小鼠交配后获得纯合子小鼠。结杲成功构建了打靶载体pBR322-MK-Trpv6。电穿孔后，共获得24个正确同源重组的克隆，同源重组效率为25％。同源重组的克隆经显微注射后，共获得4只嵌合率大于50％的雄鼠。嵌合鼠与C57BL／6J小鼠交配，获得57只来源于ES细胞的灰鼠，PCR鉴定证实其中17只为杂合子小鼠，阳性率为29．8％。杂合子小鼠交配获得纯合子小鼠。经蛋白质印迹分析证实纯合子小鼠无Trpv6蛋白的表达。结论成功建立了Trpv6基因敲除小鼠模型，其中纯合子小鼠未出现胚胎致死现象。