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小鼠水通道蛋白1基因慢病毒载体构建及其在神经膜细胞中的

【作者】 章杰 [1,2] ; 江华 [1] ; 汪汇 [1] ; 方帆 [1] ; 宋艳玲 [1] ; 芦立轩 [1]

【关键词】 水通道蛋白1 过表达 慢病

摘要】目的构建表达小鼠水通道蛋白1(AQPl)基因的慢病毒载体,体外感染原代培养的C57BL/6小鼠神经膜细胞,观察是否提高AQPl的表达,为进-步研究AQPl与周围神经系统损伤后水肿的关系奠定基础。方法将小鼠AQPl基因克隆到慢病毒pCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP-AQPl与包装质粒psPAX2、pMD共转染293T细胞,制备携带AQPl基因的慢病毒lentivirus-AQPl。体外培养C57BL/6小鼠的神经膜细胞,将lentivirus-AQPl感染神经膜细胞,RT-PCR和蛋白质印迹法检测感染后神经膜细胞AQPlmRNA和蛋白的表达情况。结果构建的慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EFl-copGFP-AQPl经PCR鉴定和测序正确。慢病毒lentivirus-AQPl感染神经膜细胞后AQPl表达增加(P〈0.05)。结论成功构建了小鼠AQPl基因的慢病毒表达载体,该载体能有效感染神经膜细胞,使AQPlmRNA和蛋白表达水平增高。

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        出版单位:《第二军医大学学报》编辑部
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