01 现在的位置:首页 > 期刊导读 > 2014 > 01 >

三种DNA抽提方法对新鲜血细胞及冻血细胞DNA抽提效能的比较

【作者】 金晶 [1] ; 朱玲 [2] ; 高军 [1] ; 吴洪玉 [1] ; 满晓华 [1] ; 朱艳平 [1] ; 龚燕芳 [1] ; 李兆申 [1]

【关键词】 DNA抽提 外周血 血细胞 D

摘要】目的比较3种血细胞DNA提取方法(进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚抽提方法)对新鲜血细胞及冻血细胞DNA的提取效率及差异。方法收集20例胰腺癌患者5mL外周血标本,经低速离心获得血细胞沉淀后分装,根据保存方式分为新鲜血细胞和冻血细胞。新鲜血细胞不经冻存,在12h内迅速抽提DNA;冻血细胞在-40℃保存72h后,室温解冻后抽提DNA。抽提方法分别采用进口试剂盒(Qiagen公司)、国产试剂盒(天根生化科技有限公司)和改良苯酚方法。琼脂糖电泳检测DNA片段的完整性,核酸蛋白检测仪测定DNA纯度和浓度,计算不同抽提方法的DNA得率。结果在获得的DNA完整性方面,改良苯酚方法抽提的基因组DNA断裂和降解较少,而进口和国产试剂盒抽提的DNA均有一定程度的降解小片段。在获得DNA的纯度方面,部分冻存血细胞无论应用进口试剂盒、国产试剂盒和改良苯酚方法,均表现出一定的污染杂峰。在DNA得率方面,无论新鲜血细胞和冻存血细胞,均是进口试剂盒得率最高,其次为国产试剂盒;冻血细胞的改良苯酚法DNA得率与国产试剂盒相当,新鲜血细胞的改良苯酚法DNA得率最低。在耗时和成本分析中,试剂盒较快但成本较高。结论改良苯酚抽提法可获得较进口和国产试剂盒片段更长、更完整的基因组DNA,虽然在得率和耗时方面稍逊色,但其成本较低,可推荐用于大规模、分批次、低成本冻存血细胞的基因组DNA抽提。

上一篇:荧光光谱分析5种黄连生物碱与蛋白和DNA的作用
下一篇:睡眠K复合波的功能及其模型

        出版单位:《第二军医大学学报》编辑部
        单位地址:上海市杨浦区翔殷路800号第二军医大学学报编辑部
        邮编:200433