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稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株的构建

【作者】 王林辉 [1] ; 黄霆 [2] ; 杨庆 [1] ; 陈伟 [1] ; 吴震杰 [1] ; 孙颖浩 [1]

【关键词】 短发夹RNA CXCR4 肾癌细胞

摘要】目的应用RNA干扰技术降低肾癌A498细胞株的CXCR4基因表达水平,并建立稳定转染细胞株。方法针对CXCR4基因设计合成siRNA,转染肾癌A498细胞株,采用RT-PCR法检测CXCR4基因表达变化,根据有效干扰片段结果合成重组shRNA质粒,稳定转染至A498细胞系并进行G418抗性筛选细胞株。采用RT-PCR和Westen印迹法检测CXCR4mRNA及蛋白表达水平,应用流式细胞技术检测CXCR4shRNA诱导A498细胞凋亡的效应,Transwell试验检测细胞侵袭能力的改变。结果将CXCR4重组shRNA质粒成功转染A498细胞后,肾癌细胞内可见绿色荧光,通过G418筛选,获得了CXCR4基因沉默的A498细胞系,RT-PCR及Western印迹检测证实该细胞系的CXCR4水平明显低于对照组的表达水平(P〈0.05)。CXCR4shRNA组细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率均显著高于对照组(P〈0.05),Tran-swell体外侵袭实验显示CXCR4shRNA能明显抑制A498细胞的体外侵袭力(P〈0.05)。结论成功构建稳定沉默CXCR4表达的肾癌A498细胞株,转染后的细胞凋亡率升高,体外侵袭能力降低,为后续研究奠定了基础

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        出版单位:《第二军医大学学报》编辑部
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        邮编:200433