【摘要】目的构建野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1（dynactin-1）真核表达载体，并观察其在小鼠足细胞中表达。方法以总RNA反转录合成的eDNA为模板，通过PCR扩增得到小鼠dynactin-1的全长eDNA，将该片段克隆到真核表达载体pcDNA3．1（＋）-FLAG和pEGFP-N1；利用部位特异性突变插入方法构建突变型表达载体，经酶切和测序鉴定；各载体转染小鼠足细胞MPC5后，用蛋白质印迹分析法和免疫荧光显微镜法检测dynactin-1蛋白表达。结果PCR扩增得到大小为3．8kb的小鼠dynactin-1片段，连接到载体后，酶切鉴定电泳结果分别显示pcDNA3．1（＋）-FLAG（5．4kb）、pEGFP—N1（4．7kb）以及小鼠dynactin-1（3．8kb）片段，测序分析结果显示克隆的野生型和突变型小鼠dynactin-1序列与数据库序列相同；蛋白质印迹分析法检测到重组dynactin-1的蛋白条带；免疫荧光显微镜观察到dynactin-1主要表达在小鼠足细胞的细胞质。结论成功构建了野生型和突变型小鼠dynactin-1真核表达载体，并在足细胞中表达，为进一步开展细胞生物学研究奠定了实验基础。