【摘要】[摘要]目的建立稳定转染GLIlsiRNA表达质粒的人胰腺癌细胞株，并鉴定其干扰效率。方法采用荧光定量PCR法（qRT—PCR）检测5株人胰腺癌细胞中GLll基因的表达，筛选出GLll基因表达量最高的细胞作为目标转染细胞。脂质体转染法将构建好的3个干扰质粒pGCsi—U6-GLllsiRNA-1、pGCsi—U6-GLIlsiRNA-2、pGCsi—U6-GLIlsiRNA一3分别转染入目标细胞，G418抗性筛选阳性克隆，荧光显微镜下观察转染效率。采用qRT—PCR法和蛋白质印迹法检测各组稳定转染细胞中GLllmRNA及蛋白的表达水平，鉴定干扰效率。结果筛选出GLll基因表达量最高的Panc-1细胞株作为目标转染细胞；3个干扰质粒均成功转染Panc-1细胞，G418筛选后获得稳定转染细胞Panc-1／GLIlsiRNA1、Panc-1／GLnsiRNA-2、Panc-1／GLIlsiRNA-3，荧光显微镜下可见3个质粒的转染效率均在80％以上；qRT-PCR及蛋白质印迹检测证实Panc-1／GLIlsiRNA-1、Panc1／GLIlsiRNA-2、Panc1／GLIlsiRNA-3细胞中GI。11mRNA和蛋白的表达水平均显著低于阴性对照质粒（Panc-1／siControl）转染细胞及空白对照细胞（P〈O．05），其中Panc-1／GLIlsiRNA-1细胞表达量最低。结论成功构建了稳定沉默GLll基因表达的胰腺癌细胞株Panc-1／GLIlsiRNA-1，为后续研究奠定了基础。