旋转超滤:一种提取细胞外泌体的新方法
【作者】
胡国文
[1] ;
李青
[2] ;
牛鑫
[2] ;
胡斌
[2] ;
刘鹃
[1] ;
沈晓黎
[1] ;
汪泱
[2] ;
邓志锋
[1,3]
【关键词】
外泌体
间质干细胞
旋转超
【摘要】目的建立一种利用旋转超滤技术从骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)培养上清液中分离外泌体(exosome)的方法。方法收集BMSCs细胞培养上清,低速离心去除残余细胞,0.22“m滤器过滤除去细胞碎片,采用旋转超滤技术提取外泌体。应用透射电子显微镜观察所获外泌体的形态,用蛋白质印迹法检测外泌体标记物CD63、CD9蛋白的表达,用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖活性的影响。结果使用旋转超滤技术成功分离出BMSCs分泌的外泌体,透射电镜下外泌体为圆形或椭圆形,直径约100nm,蛋白质免疫印迹法检测结果显示外泌体中有其特异标记物CD63、CD9蛋白的表达。外泌体能够促进HUVECs增殖,并且其促细胞增殖作用随浓度增高而增强。结论旋转超滤技术是一种简单有效的提取外泌体的方法。
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