MiR-429调节肝细胞癌炎性微环境、分化及增殖
【作者】
吕桂帅
[1] ;
李亮
[1,2] ;
陈昕
[1] ;
杨文
[1,2] ;
方田
[1] ;
余艳婷
[1] ;
陈磊
[1,2] ;
王红阳
[1,2]
【关键词】
肝细胞癌
miR-429
EpCAM细
【摘要】目的观察miR-429对人肝细胞癌(HCC)炎性浸润、分化以及增殖的影响。方法利用免疫磁珠法分选人肝癌细胞系HCCLM3细胞,得到EpCAM(CD326)阳性以及阴性的细胞。对两种细胞分别进行miR-429的干扰(AntagomiR-429)与过表达(miR-429mimic),通过流式细胞技术、real—timePCR法检测其干预效果。利用CCK-8法检测miR-429过表达及干扰肝癌细胞系的增殖活性并绘制生长曲线。分别利用干扰miR-429的EpCAM阳性HCCLM3细胞及其对照、过表达miR-429的EpCAM阴性HCCLM3细胞及其对照进行NOD-SCID小鼠皮下荷瘤实验,通过免疫组织化学法检测成瘤后癌组织内炎性细胞浸润情况及增殖分化相关蛋白的表达情况。结果干扰miR-429的表达能降低EpCAM阳性肝癌细胞的比例,反之,过表达miR-429能促使EpCAM阴性肝癌细胞转化为EpCAM阳性细胞。过表达miR-429可增强EpCAM阴性肝癌细胞在小鼠体内的成瘤能力,而干扰miR-429表达可降低EpCAM阳性细胞成瘤率;与对照相比,过表达miR-429的瘤体组织中出现大量的巨噬细胞,提示miR-429可招募炎性细胞浸润从而促进肿瘤发展;AFP染色提示miR-429与肿瘤的低分化有关;Ki67染色结果证实miR-429在体内能够促进肿瘤组织生长。与对照相比,miR-429在体外也可以促进肝癌细胞的增殖,差异具有统计学意义(P〈0.05)。结论miR-429能够在体外、体内水平影响EpCAM阳性细胞的比例,显著影响肝肿瘤微环境、促进肿瘤细胞的增殖活性并降低其分化潜能。
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