【摘要】目的 为铜绿假单胞菌外膜蛋白H（OprH）工业发酵与疫苗开发研究奠定基础。方法 采用分子克隆技术构建OprH蛋白的表达菌株,通过正交试验设计筛选OprH菌株的最佳培养条件与表达条件。利用切胶纯化获得OprH蛋白并免疫小鼠,制备OprH蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体滴度,蛋白质印迹法检测抗血清特异性;对小鼠免疫OprH蛋白,攻毒铜绿假单胞菌,检测蛋白的免疫保护作用。结果 OprH重组载体双酶切、DNA测序鉴定结果,以及蛋白表达、纯化条带大小与预测一致。OprH菌株最佳培养条件为转速230r/min,葡萄糖浓度0%,装液量50mL;最佳诱导表达条件为异丙基-β-D-硫代半乳糖苷终浓度0.3mmol/L,诱导时菌液D600值0.8,温度32℃,诱导时间3h。ELISA法获得OprH抗血清滴度达1∶1 600,蛋白质印迹法证实抗血清具有很好的特异性。OprH免疫小鼠激活的特异性免疫对小鼠铜绿假单胞菌感染的保护率达到46.15%,与对照相比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 成功构建OprH表达载体,纯化获得OprH蛋白,制备OprH蛋白多克隆抗体,实验结果表明OprH蛋白对小鼠铜绿假单胞菌感染具有免疫保护作用,并获得OprH蛋白菌株的最佳培养条件与表达条件。