【摘要】目的构建携带C57BL／6小鼠雌激素受体a（estrogen receptor a，Era）的重组慢病毒，感染原代培养的小鼠神经细胞，观察是否能提高Era的表达，为进一步研究Era与神经系统疾病的关系奠定基础。方法将Era基因片段插人慢病毒主体载体LV-GFP-flag，构建重组慢病毒载体LV-Era-flag。通过琼脂糖凝胶电泳（agarosegelelectrophoresis，AGE）、基因i见0序验证后，将I。V-Era-flag与包装质粒pHelperl．0、pHelper2．0共同转染293T细胞，测定病毒滴度，获得携带Era基因的重组慢病毒V-Era-flag。无血清培养C57BL／6小鼠的神经细胞，对照病毒V-GFP-flag感染神经细胞，在荧光显微镜下每天观察荧光表达情况，用流式细胞仪检测感染效率和凋亡率以获得最佳感染复数（multiplicity of infection，MOI）。然后用最佳MOI值的重组慢病毒V-Eraflag感染神经细胞，采用实时定量PCR、蛋白质印迹方法检测感染后细胞中Era的转录和蛋白表达水平。结果AGE及测序鉴定均表明重组慢病毒载体构建成功，包装、扩增后得到V-Era-flag，感染滴度为2x10。TU／ml；MOI-5的对照病毒v-GFP-flag能感染神经细胞，感染效率达（89．8土4．03）％，而凋亡率仅为（3．6±0．29）％。神经细胞至少能存活8周，在此期间GFP能持续表达，说明慢病毒能有效而稳定感染神经细胞。用MOI=5的V-Era-flag感染神经细胞后，能显著增强神经细胞中的EramRNA和蛋白表达水平。结论成功构建了携带Era基因的重组慢病毒，其能成功感染神经细胞，使EramRNA和蛋白表达水平增高。