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Wip1联合Bmi1参与人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复

【作者】 俞蕾 [1] ; 何奖图 [2] ; 王勤婉 [2] ; 于永春 [2] ; 潘秋辉 [2] ; 李晶华 [2]

【关键词】 椎间盘退行性疾病 辐射损伤

摘要】目的探讨野生型p53诱导的蛋白磷酸酶1(Wip1)在人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复中的可能作用,为椎间盘退行性变的临床诊治提供参考。方法取人椎间盘髓核细胞体外培养,小干扰(siRNA)技术干扰细胞Wip1表达,放射性照射(4、10、15、25Gy)髓核细胞,采用彗尾实验观察DNA损伤及损伤修复反应(DNAdamagerepair,DDR)情况,并与未干扰Wip1髓核细胞作对照;采用免疫共沉淀(Co~IP)技术检测Wip1潜在结合蛋白;根据筛选结果采用实时定量RT—PCR技术检测病变椎间盘组织M声1及潜在结合蛋白的表达情况。结果彗尾实验表明:干扰叭p1表达后,25Gy剂量射线导致髓核细胞DNA损伤的修复并不受影响,但DDR持续激活,对照组在照射后24h已经检测不到DNA损伤修复的标识分子,但siRNA干扰Wip1表达组细胞照射后48h仍可检测到标识分子。Co—IP实验表明:放射性照射正常对照细胞后,Wip1与Bmi1在细胞核内分布重合,而且聚集在DNA损伤位点,而siRNA抑制wip1表达后,这种结合随即消失。实时定量RTPCR结果表明:与正常椎间盘组织相比,椎间盘退变组织Wip1、Bmi1基因表达下降,且两者呈正相关(P%O.05)。结论Wip1通过调控DDR时限参与了人椎间盘髓核细胞放射性损伤DNA修复,Broi1可能参与此过程。

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        出版单位:《第二军医大学学报》编辑部
        单位地址:上海市杨浦区翔殷路800号第二军医大学学报编辑部
        邮编:200433