【摘要】目的 确定本实验室建立的肽核酸钳制（PNA）-PCR/K-ras突变检测方法的阳性判断标准,并评价其对结直肠癌组织的诊断价值。方法 将含K-ras基因12密码子突变的质粒和野生质粒以不同比例（突变/总体：0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100）混合作为标准样品,独立配制6个批次并分别进行PNA-PCR/K-ras突变检测,收集K-ras突变CT值及K-ras总体CT值,计算ΔCT值（突变CT值-总体CT值）,采用ROC曲线分析突变CT值和ΔCT值诊断K-ras突变的最适Cut-off值,联合两者最适Cut-off值,设定该方法的最终阳性判断标准。分别采用该方法和直接测序法对35例结直肠癌组织及对应癌旁组织进行K-ras突变检测并比较分析。结果 突变模板浓度为1/800及以上的标准样品突变CT值和ΔCT值与阴性标准品之间差异存在统计学意义（P〈0.05）；突变CT值和ΔCT值的最适Cut-off值分别为41.7和15.4。最终阳性判断标准为突变CT值≤41.7或ΔCT值≤15.4,对应的ROC曲线下面积为0.955（P=0.001）,以此判断标准,各标准样品 （0,1/3 200,1/1 600,1/800,1/400,1/200,1/100）的阳性检测率分别为0%、66.7%、83.3%、100%、100%、100%、100%,检测下限为1/800。在结直肠癌及癌旁组织标本中,该方法阳性检测率为45.7%（32/70）,与直接测序法（18.6%,13/70） 比较差异具有统计学意义（P=0.000）。结论 PNA-PCR/K-ras突变检测方法具有较高的检测灵敏度,在结直肠癌组织样本中具有较直接测序法更高的阳性检出率。