应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA-301a敲除小鼠

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【作者】刘宣 [1] ; 季青 [1] ; 李文 [2] ; 周利红 [1] ; 王璇 [2] ; 江海丽 [1] ; 陈静 [1] ; 畅立圣 [1] ; 李琦 [1]

【关键词】 CRISPR Cas9 基因编辑 miR

【摘要】目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA敲除小鼠模型。方法根据miRNA基因序列,设计针对miR-301a的gRNA引物序列（双靶点）,PCR扩增获得针对miR-301a的体外转录模板DNA和构建Cas9体外转录模板,然后进行Cas9和gRNA体外转录。利用体外转录的gRNA/Cas9mRNA对小鼠受精卵显微注射,并利用T7E1酶切和基因测序对miR-301a突变进行检测和鉴定。结果 PCR扩增、凝胶电泳和基因测序鉴定证实,获得序列正确的用于体外转录的模板DNA;体外转录获得gRNA/Cas9mRNA,顺利完成对小鼠受精卵的显微注射;利用T7E1酶切对miR-301a突变进行检测,发现8只新生小鼠中有7只（87.5%）被鉴定在miR-301a位点携带突变;基因测序结果显示,各小鼠均有不同程度的碱基插入或缺失突变,其中缺失碱基数目最多的4号小鼠产生31个碱基缺失。结论成功建立miR-301a基因高效敲除小鼠模型。

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应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA-301a敲除小鼠

【作者】 刘宣 [1] ; 季青 [1] ; 李文 [2] ; 周利红 [1] ; 王璇 [2] ; 江海丽 [1] ; 陈静 [1] ; 畅立圣 [1] ; 李琦 [1]

【关键词】 CRISPR Cas9 基因编辑 miR

【作者】刘宣 [1] ; 季青 [1] ; 李文 [2] ; 周利红 [1] ; 王璇 [2] ; 江海丽 [1] ; 陈静 [1] ; 畅立圣 [1] ; 李琦 [1]