碱性成纤维细胞生长因子对国产多孔钽-软骨细胞复合物软骨
【作者】
张辉
[1,2] ;
王茜
[1,3] ;
赵阳
[4] ;
甘洪全
[4] ;
王辉
[1] ;
毕成
[1,4] ;
李琪佳
[5] ;
王志强
[1,4]
【关键词】
碱性成纤维细胞生长因子
国
【摘要】目的对比不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对国产多孔钽-软骨细胞复合物维持软骨细胞表型和去分化作用的影响。方法分离培养3周龄新西兰幼兔膝关节软骨细胞,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、番红O(Safranin O)染色鉴定软骨细胞;取第3代软骨细胞分为5组:A组(1ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),B组(10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),C组(50ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞),D组(多孔钽-软骨细胞)及E组(软骨细胞);MTT法检测不同浓度bFGF对多孔钽-软骨细胞生长及增殖状态的影响;扫描电镜观察bFGF-多孔钽-软骨细胞复合物细胞形态及生长;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ、Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色检测软骨细胞表型变化及去分化状态;real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达。结果Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及Safranin O染色均呈阳性反应,证实所分离培养的细胞为软骨细胞;1、10、50ng/mL bFGF均可促进软骨细胞增殖,各实验组(A-D组)软骨细胞增殖与对照组(E组)相比,差异有统计学意义,其中10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞增殖最为明显(P〈0.05);组间比较差异有统计学意义(P〈0.05);扫描电镜观察:各组软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内生长、黏附,早期呈不等的球形,24h后胞质延展并向周围伸出多条突起,相互连接、延展向孔隙内部生长,细胞间相互融合并覆盖支架材料;Ⅰ、Ⅱ、Ⅸ和Ⅹ型胶原免疫细胞化学染色显示10ng/mL bFGF-多孔钽-软骨细胞组(B组)Ⅱ和Ⅸ型胶原表达高于对照组(E组,P〈0.05),组间差异也有统计学意义(P〈0.05);而Ⅰ和Ⅹ型胶原表达则低于对照组(E组,P〈0.05);real time-PCR检测软骨细胞Ⅱ、Ⅹ型胶原mRNA表达显示:各实验组(A~D组)Ⅱ型胶原mRNA的表达高于对照组(E组,P〈0.05),而Ⅹ型胶原mRNA表达量则低于对照组(E组,P〈0.05)。结论 b
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