Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的研究
【作者】
徐倩
[1,2] ;
刘贵敏
[1,2] ;
谷蕾
[1] ;
梁文同
[1] ;
成志勇
[1]
【关键词】
骨髓增殖性肿瘤
鲁索替尼
【摘要】目的探讨JAK2抑制剂Ruxolitinib对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡作用的机制。方法用不同浓度(0、1、5、10、50、100、500nmol/L)的Ruxolitinib处理HEL细胞,其中0nmol/L为对照组。CCK-8法检测细胞活力;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞周期;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;试剂盒检测Caspase-3/7活性;RT-PCR检测JAK2mRNA水平;蛋白质印迹法检测p-JAK2、p-ERK、Bcl-2、Bim蛋白表达。结果不同浓度Ruxolitinib作用HEL细胞48h后,细胞活力分别为(97.0±4.4)%、(92.0±3.9)%、(88.0±3.7)%、(81.0±3.1)%、(64.0±2.9)%、(38.0±2.2)%;Hoechst33342凋亡细胞染色显示100nmol/L Ruxolitinib处理细胞48h后,亮蓝色凋亡细胞[(49.21±1.80)%]较对照组[(10.02±1.40)%]增多(P〈0.05);流式细胞术结果显示100nmol/L Ruxolitinib作用细胞48h后G0/G1期细胞比率[(73.1±3.6)%]高于对照组[(45.2±3.0)%];1~500nmol/L Ruxolitinib作用12、24h后,HEL细胞线粒体膜电位降低,Caspase-3/7活性增强;RT-PCR结果显示,不同浓度Ruxolitinib处理HEL细胞48h后JAK2mRNA表达呈剂量依赖性减低;蛋白质印迹检测结果显示,实验组细胞p-JAK2、p-ERK、Bcl-2蛋白表达较对照组降低(均P〈0.01),Bim蛋白表达增加(P〈0.01)。结论 Ruxolitinib可能通过抑制JAK2及ERK激酶途径诱导HEL细胞凋亡。
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