应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒
【作者】
范丽
[1] ;
徐增辉
[2] ;
金华君
[2] ;
徐凤青
[1] ;
丁娜
[1] ;
严淋
[2] ;
钱其军
[1,2]
【关键词】
杆状病毒系统
腺相关病毒
【摘要】目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associatedvirus,AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力。结果实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×10^12vg/ml,100ml摇瓶共得到1.5×10^13vgrAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达。结论应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研奔奠守了基础。
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