【摘要】目的 构建RNA干扰（RNAi）重组体抑制Pyg02的表达，并探讨其对脑胶质瘤U251细胞增殖、侵袭的影响及其机制。方法针对Pyg02cDNA序列设计并合成一对特异性的含有短发卡的寡核苷酸序列及其阴性对照序列，经退火后插入pSuper中构建重组体。经EcoRI和HindⅢ双酶切鉴定和DNA测序后，用脂质体2000将其转染脑胶质瘤U251细胞，采用实时定量PCR和蛋白质印迹方法检测Pyg02shRNA对U251细胞Pyg02 mRNA和蛋白表达的干扰效果，MTT法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期分布，BrdU掺人法检测DNA合成，Transwell检测细胞侵袭。采用蛋白质印迹和免疫荧光法检测Pyg02 shRNA对U251细胞cyclinD1、βcatenin蛋白水平和亚细胞定位的影响。结果双酶切和测序鉴定证实插入序列完全正确；Pyg02 shRNA显著抑制了U251细胞Pyg02 mRNA和蛋白的表达；Pyg02 shRNA抑制U251细胞Pyg02表达后，细胞增殖显著降低，细胞更多地阻滞在G期，且BrdU掺人显著减少，侵袭细胞数显著减少。此外，抑制Pyg02表达可显著下调U251细胞cyclinD1的表达但不改变其亚细胞定位。U251细胞β-catenin表达及其亚细胞定位无明显改变。结论成功构建了抑制Pyg02表达的重组载体。抑制Pyg02表达能有效地抑制脑胶质瘤U251细胞DNA合成，可能通过下调wnt信号靶基因cyclin D1的表达，使细胞阻滞于G1期而抑制细胞增殖和侵袭。